信息摘要：

在(zai)進行薄層色譜TLC實驗(yan)時(shi)，操作紫外(wai)線燈(deng)時(shi)要佩戴好紫外(wai)線防護面罩，因為(wei)你TLC試驗(yan)用(yong)的都是雙波長紫外(wai)線燈(deng)，短波對(dui)皮膚(fu)很(hen)眼(yan)睛傷(shang)(shang)害(hai)特大(da)，長波對(dui)眼(yan)睛傷(shang)(shang)害(hai)很(hen)大(da)，不做防護臉部皮膚(fu)會起泡和紅腫，眼(yan)睛會造成(cheng)玻璃體(ti)混(hun)濁，視(shi)力下降。

在(zai)進行薄層色譜TLC實驗時，操作紫外線(xian)(xian)燈(deng)時要佩戴好LUV-40紫外線(xian)(xian)防護面罩，因(yin)為你TLC試(shi)驗用(yong)的(de)都(dou)是(shi)雙波長紫外線(xian)(xian)燈(deng)，短(duan)波對(dui)皮膚很眼(yan)睛傷(shang)害(hai)特大，長波對(dui)眼(yan)睛傷(shang)害(hai)很大，不(bu)做防護臉部皮膚會起泡(pao)和(he)紅腫，眼(yan)睛會造成玻璃體混濁，視力下(xia)降。

先將LEAC-280L紫外線燈電源插上，選擇打開需要照射的波長開關，把跑膠板放在紫外線燈下面照射即可。如果有LCM-26紫外線觀察箱，在紫外線觀察箱里面觀察效果會更好。

薄層色譜(pu)（TLC）實驗步驟：

1、切(qie)(qie)(qie)割(ge)薄板。通常，買來(lai)的(de)硅膠板都是方(fang)形的(de)玻(bo)璃板，必需用鉆石頭(tou)玻(bo)璃刀按照模板的(de)形狀(zhuang)進行(xing)切(qie)(qie)(qie)割(ge)。在切(qie)(qie)(qie)割(ge)玻(bo)璃之前，用尺子和鉛(qian)筆在薄板的(de)硅膠面上輕輕地標出(chu)基(ji)線的(de)位(wei)置(zhi)（注意不(bu)要損(sun)壞(huai)硅膠面）。借(jie)助鋒利的(de)玻(bo)璃切(qie)(qie)(qie)割(ge)刀和一(yi)把引導尺，你便(bian)(bian)可(ke)方(fang)便(bian)(bian)地進行(xing)玻(bo)璃切(qie)(qie)(qie)割(ge)。當整塊玻(bo)璃被切(qie)(qie)(qie)割(ge)后(hou)，你就(jiu)可(ke)以(yi)進一(yi)步將其分成若干獨立的(de)小(xiao)塊了(le)。（開始的(de)時候，也許(xu)你會(hui)感到有一(yi)些難(nan)度，但經(jing)過一(yi)些訓(xun)練以(yi)后(hou)，你便(bian)(bian)會(hui)熟練地掌握該項(xiang)技術。）

2、選取合(he)適的(de)(de)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)體系。化(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)在(zai)薄(bo)板(ban)上移(yi)動(dong)距(ju)離(li)的(de)(de)多(duo)(duo)少取決于(yu)(yu)所選取的(de)(de)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)不同(tong)。在(zai)戊烷(wan)和己(ji)烷(wan)等非(fei)極(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)中(zhong)(zhong)，大多(duo)(duo)數極(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)物(wu)(wu)(wu)質不會(hui)移(yi)動(dong)，但是(shi)非(fei)極(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)化(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)會(hui)在(zai)薄(bo)板(ban)上移(yi)動(dong)一(yi)定(ding)距(ju)離(li)。相反(fan)，極(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)通常會(hui)將非(fei)極(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)的(de)(de)化(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)推到(dao)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)的(de)(de)前(qian)段而(er)將極(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)化(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)推離(li)基(ji)線(xian)。一(yi)個好(hao)的(de)(de)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)體系應(ying)該使混合(he)物(wu)(wu)(wu)中(zhong)(zhong)的(de)(de)化(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)都(dou)離(li)開基(ji)線(xian)，但并不使化(hua)(hua)合(he)物(wu)(wu)(wu)都(dou)到(dao)達溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)前(qian)端，Rf值好(hao)在(zai)0.15~0.85之(zhi)間。雖然這個條件不一(yi)定(ding)都(dou)能(neng)滿(man)足，但這應(ying)該作為薄(bo)層(ceng)色譜分析(xi)的(de)(de)目標(biao)(biao)（在(zai)柱色譜中(zhong)(zhong)，合(he)適的(de)(de)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)應(ying)該滿(man)足Rf在(zai)0.2~0.3之(zhi)間）。那么(me)，應(ying)該選取哪些(xie)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)呢(ni)？一(yi)些(xie)標(biao)(biao)準(zhun)溶(rong)(rong)(rong)劑(ji)和他們(men)的(de)(de)相對極(ji)(ji)性(xing)(xing)(xing)列(lie)于(yu)(yu)如下：

強極性溶(rong)劑：

甲醇>乙醇>異丙醇

中等極(ji)性(xing)溶劑：

乙(yi)腈>乙(yi)酸乙(yi)酯(zhi)>氯(lv)仿>二(er)氯(lv)甲(jia)烷>乙(yi)MI>甲(jia)苯

非(fei)極(ji)性溶劑：

環己烷(wan)，石油醚，己烷(wan)，戊(wu)烷(wan)

常用混(hun)合溶劑：

乙(yi)酸乙(yi)酯(zhi)/己烷：常(chang)用濃度0~30%。但有時較(jiao)難在(zai)旋轉蒸(zheng)發(fa)儀上除去溶劑。

乙MI/戊烷體系(xi)：濃(nong)度為(wei)0~40%的比較常用。在旋轉(zhuan)蒸發器上非常容易除去。

乙醇(chun)/己烷或戊(wu)烷：對強(qiang)極性化合物(wu)5~30%比較合適。

二氯甲烷(wan)/己(ji)烷(wan)或(huo)戊烷(wan)：5~30%，當其他混合(he)溶劑(ji)失敗時可(ke)以(yi)考慮使用。

3、將(jiang)1~2mL選(xuan)定的溶(rong)劑體系倒入展(zhan)開池(chi)中，在(zai)展(zhan)開池(chi)中放置一大塊濾紙。

4、將化合(he)物(wu)在標記過(guo)的(de)基(ji)線處進(jin)行點(dian)樣(yang)。我(wo)們用的(de)毛細(xi)管(guan)(guan)是買來的(de)，此外，毛細(xi)管(guan)(guan)也可從加熱過(guo)的(de)Pasteur吸管(guan)(guan)上(shang)拔下。在跟蹤反(fan)應(ying)(ying)進(jin)行時，一(yi)定要點(dian)上(shang)起始反(fan)應(ying)(ying)物(wu)、反(fan)應(ying)(ying)混合(he)物(wu)以及兩者的(de)混合(he)物(wu)。

5、展開：讓(rang)溶(rong)劑向上展開約90%的薄板長(chang)度。

6、從展開池中取出薄板并(bing)且馬上用(yong)鉛筆標注出溶劑到(dao)達(da)的(de)前沿位(wei)置(zhi)。根據這個計算Rf的(de)數值。

7、讓(rang)薄板上的溶(rong)劑揮發(fa)掉。

8、用非破壞性技(ji)術觀(guan)察薄(bo)板。好的非破壞性方(fang)法就是用紫外燈(deng)進(jin)行觀(guan)察。將薄(bo)板放在紫外燈(deng)下，用鉛筆標出有紫外活性的點(dian)。盡管在5.301中不用這種(zhong)方(fang)法，但我們將采用另一常用的無損方(fang)法——用碘染色法。

9、用破壞(huai)性(xing)方式觀(guan)測薄板(ban)。當化(hua)合物沒(mei)有紫外活性(xing)的(de)(de)(de)(de)時(shi)候，只能采用這(zhe)種(zhong)方法。在(zai)各(ge)種(zhong)TLC顯色(se)劑(ji)的(de)(de)(de)(de)調(diao)配方法中，提供(gong)了很多(duo)非常有用的(de)(de)(de)(de)染色(se)劑(ji)。使(shi)用染色(se)劑(ji)時(shi)，將干燥的(de)(de)(de)(de)薄板(ban)用鑷子夾起(qi)并放入染色(se)劑(ji)中，確保從基線(xian)到溶劑(ji)前(qian)沿都被浸沒(mei)。用紙巾擦干薄板(ban)的(de)(de)(de)(de)背面(mian)。將薄板(ban)放在(zai)加(jia)熱(re)板(ban)上觀(guan)察(cha)斑(ban)點的(de)(de)(de)(de)變化(hua)。在(zai)斑(ban)點變得可見而且背景顏(yan)色(se)未能遮蓋住(zhu)斑(ban)點之前(qian)，將薄板(ban)從加(jia)熱(re)板(ban)上取下。

10、根據初始薄層色譜結果(guo)修改溶(rong)劑體系(xi)的選擇。如果(guo)想讓Rf變(bian)得更(geng)大(da)一(yi)些(xie)，可(ke)使溶(rong)劑體系(xi)極性更(geng)強(qiang)些(xie)；如果(guo)想讓Rf變(bian)小(xiao)(xiao)，就應(ying)該使溶(rong)劑體系(xi)的極性減小(xiao)(xiao)些(xie)。如果(guo)在薄板(ban)上(shang)點樣(yang)變(bian)成了(le)條紋狀而不(bu)是一(yi)個圓圈狀，那么你(ni)的樣(yang)品(pin)濃(nong)度可(ke)能太高了(le)。稀釋樣(yang)品(pin)后再進行(xing)一(yi)次薄板(ban)層析，如果(guo)還是不(bu)能奏效，就應(ying)該考慮換一(yi)種(zhong)溶(rong)劑體系(xi)。

11、做(zuo)好TLC標記，計算(suan)每個斑點的(de)Rf值，并且在筆(bi)記本(ben)中畫(hua)出圖樣。